止水铜板
2020版《中国药典》红外分光光度法检验操作规程（USP）⼀、⽬的：
制订详尽的⼯作程序，规范检验操作，保证检验数据的准确性。
⼆、范围：
本操作规程适⽤于参考美国药典标准检验品种红外分光光度法的测定。
三、职责：
1、检验员：严格按操作规程操作，认真、及时、准确地填写检验记录；
2、化验室负责⼈：监督检查检验员执⾏本操作规程。山药去皮机
四、内容：
1、分光光度主要⽤以鉴别⼤多数⼀般化学物质。以下的步骤适⽤于能吸收红外及紫外射线的物质（参见分光光度法和光散射<851>） 2、⼀个物质的红外吸收光谱，在与从对应的USP标准品处获得的光谱图进⾏⽐较后，或许提供了从任何单⼀检验中所能获得的关于该物质的鉴别的最具决定性的证据。⽽另⼀⽅⾯，紫外吸收图谱则并未展⽰出⾼度的特异性。如⼤部分药典专论中所要求的，⽤于供试样品符合红外吸收和紫外吸收检验标准，鉴别⼏乎不会导致任何质疑。 3、总共有7种⽅法⽤以制备分析⽤的预⼲燥的样本和标准品。
3.1 197K：待测物质与溴化钾充分混合。
集通信3.2 197M：待测物质细磨并与矿物油均匀混合。
3.3 197F：待测物质均匀悬置于适当的压⽚板之间（⽐如NaCl或者KBr）。
3.4 197S：特定浓度的溶液按专论规定的溶剂制备，除⾮专论指定不同的光程的洗收池，则该溶液在0.1mm的吸收池中检测。
3.5 197A：待测物质与内部反射元件紧密接触，做衰减全反射⽐（ATR）分析。
3.6 197E：将待测物质压成薄⽚做IR的显微分析。
3.7 197D：待测物质与不吸收红外的物质重复混合并转移到样品容器做漫反射分析。
4、当检测是定性的，且标准品的光谱图可⽤相似⽅法获得，那么ATR<197A>和<197E>分析⽅法可代替<197K>,<197M>,
<197F>和<197S>。
5、除⾮另有规定，则应在2.6微⽶⾄15微⽶（3800cm-1⾄650cm-1）范围内记录被测样品的光谱和相应的USP标准品光谱。待测样品做红外吸收光谱时，应该在和相应标准品规定条件下预先⼲燥，除⾮另有规定或者该标准品使⽤前⽆需⼲燥，然后在与相应USP标准品相同的波长下，红外吸收光谱才会出现最⼤峰值。 6、有时候根据上述⽅法得到的光谱会存在差异，这是因为异构体的存在，这种情况并⾮总是允许的（参考分光光度法和光散射 851的步骤项）。除⾮专论另有说明，则按下述步骤操作。如果分析物质和标准品的红外吸收光谱有差异，将等量的样品和标准品溶解于等体积的合适溶剂中，在相同条件及容器内将溶剂蒸⼲，对残渣做重复检测。
7、（851）分光光度法和光散射法
7.1紫外、可见、红外、原⼦吸收、荧光、浊度法、浊度法和拉曼测量
7.2吸收分光光度法是测量电磁辐射与化学物质的分⼦或原⼦之间的相互作⽤。
7.2.1药物分析中常⽤的技术包括UV、可见光、IR和原⼦吸收光谱。可见光区域的分光
光度测量以前称为⽐⾊法；然⽽，仅当考虑⼈类对颜⾊的感知时，使⽤“⽐⾊法”⼀词更为精确。
7.2.2荧光分光光度计是在化学物质受到紫外线、可见光或其它电磁辐射时测量其发射的光。通常，荧光溶液发出的光在⽐激发辐射波长长的波长处具有最⼤强度，通常约20⾄30nm。
7.2.3光散射涉及由于溶液的亚微观光密度不均匀性⽽导致的光散射的测量，并且⽤于测定分⼦量从1000到⼏亿的多分散体系的重均分⼦量。药物分析中使⽤的两种技术是浊度法和浊度法。
7.2.4拉曼光谱（⾮弹性光散射）是⼀种光散射过程，其中被测试样品被强单⾊光（通常是激光）照射，并且从样品散射的光被分析为频移。
7.2.5⽤于这些测量的波长范围从UV的短波长通过IR延伸。为了便于参考，该光谱范围⼤致分为紫外(190-380nm)、可见光(380-780nm)、近红外(780-3000nm)和红外光谱(2.5-40m或4000-250cm1)。
7.3光谱范围的⽐较效⽤
7.3.1对于许多药物物质，可以在光谱的紫外和可见区域进⾏测量，⽐近红外和红外具有更⾼的准确度和灵敏度。当在1-cm细胞中观察到溶液时，每mL约10 µg的样品浓度常常会在紫外或可见区域产⽣0.2⾄0.8的吸光度。在IR和近红外光谱中，可能需要分别1-10毫克/毫升和100毫克/毫升的浓度来产⽣⾜够的吸收；对于这些光谱范围，通常使⽤0.01毫⽶⾄3毫⽶以上的细胞长度。
7.3.2物质的UV和可见光谱⼀般没有⾼度的特异性。然⽽，它们⾮常适合于定量分析，并且对于许多物质来说，它们是有⽤的附加鉴定⼿段。
7.3.3近红外光谱在药物分析中的应⽤越来越受到⼈们的关注，特别是⽤于快速鉴定⼤量样品，以及⽤于⽔的测定。
7.3.4近红外区域特别适⽤于-OH和-NH基团的测定，如醇中的⽔、-OH在胺存在下、醇在烃中、以及伯胺和仲胺在叔胺存在下。
7.3.5除了具有相同光谱的光学异构体之外，IR光谱对于任何给定的化合物都是唯⼀的。然⽽，多态性有时可能是固体中给定化合物IR光谱差异的原因。通常，结构上的⼩差异导致光谱中的显著差异。由于IR吸收光谱中的极⼤值数量很⼤，有时可以在没有预先分离的情况下定量地测量已知定性成分的混合物的各个组分。
手上下7.3.6拉曼光谱和红外光谱提供了类似的数据，尽管光谱的强度由不同的分⼦性质决定。拉曼光谱和红外光谱对不同官能团具有不同的相对灵敏度，例如，拉曼光谱对C-S和C-C 多键特别敏感，⼀些芳⾹族化合物通过拉曼光谱更容易识别。⽔具有很强的红外吸收光谱，但特别微弱的拉曼光谱。因此，⽔的红外光谱“窗⼝”有限，可⽤于检测⽔溶液，⽽拉曼光谱⼏乎完全透明，可⽤于溶质鉴定。拉曼光谱的两个主要限制是样品的最⼩可检测浓度通常为10-1M 到10-2M，并且许多物质中的杂质会发荧光，并且⼲扰拉曼散射信号的检测。
7.3.7光学反射率测量提供类似于通过传输测量获得的光谱信息。由于反射率测量仅探测样品的表⾯组成，因此消除了与该物质的光学厚度和光散射特性相关的困难。因此，在强吸收材料上进⾏反射测量往往更为简单。⽤于红外反射率测量的⼀种特别常见的技术称为衰减总反射率(ATR)，也称为多重内反射率(MIR)。在ATR技术中，IR光谱仪的光束通过适当的IR窗材料(例如，KRS-5，TlBr-TlI共晶混合物)，其切割⾓度使得IR光束进⼊窗的第⼀(前)表⾯，但是当它撞击窗截⾯时完全反射。d(背⾯)表⾯(即，辐射对窗⼝第⼆表⾯的⼊射⾓超过该材料的临界⾓)。通过适当的窗⼝结构，在红外光束被透射出窗⼝之前，可能有许多内部反射。如果⼀个样品沿着完全反射红外光束的两侧与窗⼝紧密接触，那么在样品吸收的每个波长（频率）处，反射辐射的强度降低。因此，ATR技术提供了反射光
谱，与简单的反射测量相⽐，反射光谱的强度增加了IR光束在窗⼝内反射的次数。ATR 技术提供了极好的灵敏度，但是它产⽣差的重现性，并且不是可靠的定量技术，除⾮内部标准与每个测试样品紧密
混合。
7.3.8荧光分光光度法⽐吸收分光光度法更灵敏。在吸收测量中，将样品的透射率与空⽩的透射率进⾏⽐较；在低浓度下，两种溶液都给出⾼信号。反之，在荧光分光光度法中，溶剂空⽩具有低⽽不是⾼输出，因此可能⼲扰低浓度测定的背景辐射要⼩得多。然⽽，在浓度低于10-5M时，通过光吸收可以⽅便地测定很少的化合物，在荧光分光光度法中采⽤10-7M到 10-8M的浓度并不罕见。
7.4理论与术语
7.4.1辐射束的功率相对于它通过吸收介质的距离⽽减⼩。它也与在该介质中遇到的吸收分⼦或离⼦的浓度有关。这两个因素决定了总的⼊射能量的⽐例。通过均匀吸收介质的单⾊辐射的功率的降低⽤⽐尔定律对数log10(1/T)=A=abc进⾏定量描述，其中术语定义如下。
7.4.2吸光度[符号：A]：透射率（t）的倒数的对数，到基部10。[注]以前使⽤的描述性术语包括光密度、吸光度和消光。]
7.4.3吸光度[符号：A]-吸光度(A)除以物质(c)浓度的乘积，以g/L表⽰，吸收路径长度
(b)以cm表⽰。注意不要与吸光度指数、特定消光或消光系数混淆。]
7.4.4摩尔吸收率[符号：ε]-物质的吸收率(A)除以浓度乘积(以摩尔每L表⽰)和吸收路径长度乘以厘⽶。它也是吸收率（a）和物质分⼦量的乘积。[以前使⽤的注释术语包括摩尔吸光指数；摩尔消光系数；和摩尔吸收系数。]
7.4.5对于⽤于吸收分光光度计的⼤多数系统，物质的吸收率与⼊射辐射的强度、内部细胞长度和浓度⽆关，是常数，其结果是浓度可以光度法测定。
7.4.6⽐尔定律没有给出温度、波长或溶剂类型的影响的指⽰。对于⼤多数分析⼯作，温度的正常变化的影响是可以忽略不计的。
7.4.7与⽐尔定律的偏差可能是由化学或仪器变量引起的。⽐尔定律的明显失效可能是由于溶质分⼦之间或溶质分⼦与溶剂分⼦之间缔合或解离或电离引起的溶质分⼦浓度变化。其他偏差可能是由仪器效应引起的，例如多⾊辐射、狭缝宽度效应或杂散光。
7.4.8即使在给定溶剂中的固定温度下，吸收率也可能不是真正恒定的。然⽽，对于只有⼀个吸收组分的样品，没有必要使吸收体系符合⽐尔定律以⽤于定量分析。⼀个未知的浓度可以通过与实验确定的标准曲线进⾏⽐较⽽发现。
7.4.9虽然在最严格的意义上，⽐尔定律在原⼦吸收分光光度法中并不成⽴，因为缺乏细胞长度和浓度
的定量特性，在⽕焰中在可重复抽吸条件下发⽣的吸收过程确实遵循⽐尔定律。原则上的关系。具体地说，透射率的负对数或吸收率与吸收系数成正⽐，因此与吸收原⼦的数量成正⽐。在此基础上，可以构造校准曲线以允许根据溶液中元素的浓度来评估未知的吸收值。7.4.10吸收光谱-对波长或波长函数绘制的吸收率或任何吸光度函数的图形表⽰。
透射率[符号：T]-由样品传输的辐射功率除以⼊射到样品上的辐射功率的商。[以前使⽤的注释术语包括透射率和传输。]
7.4.11荧光强度[符号：I]-荧光活性的经验表达式，通常以与探测器响应成⽐例的任意单位给出。荧光发射光谱是活性物质发射的辐射的光谱分布的图形表⽰，显⽰发射的辐射强度为纵坐标，波长为横坐标。荧光激发光谱是激活光谱的图形表⽰，显⽰由活性物质发射的辐射强度作为纵坐标，以及⼊射(激活)辐射的波长作为横坐标。与吸收分光光度法⼀样，有机化合物的荧光所包围的电磁光谱的重要区域是紫外、可见和近红外，即250-800nm 区域。在分⼦吸收辐射之后，能量可以以热的形式损失或以与吸收辐射相同或更长波长的
辐射形式释放。辐射的吸收和发射都归因于分⼦中不同能级或轨道之间的电⼦跃迁。在光的吸收和发射之间存在时间延迟；对于⼤多数有机荧光溶液，这个间隔，即激发态的持续时间，已经被测量为⼤约10-9秒到10-8秒。荧光的短寿命将这种类型的发光与磷光区别开来，磷光是⼀种寿命长达10-3秒⾄⼏分钟的长寿命余辉。
度[符号：S]——悬浮粒⼦的光散射效应。悬浮物的量可以通过观察透射光(⽐浊法)或散射光(⽐浊法)来测量。
7.4.12 浊度[符号：τ]-在光散射测量中，浊度是给定悬浮液单位长度上⼊射光强度降低的度量。
7.4.13拉曼散射活性-随机取向样品的拉曼带强度的分⼦特性（单位为cm4per g）。散射活性由分⼦极化率相对于产⽣拉曼位移带的分⼦运动的导数确定。通常，拉曼带强度与分析物的浓度成线性⽐例。
7.5参考标准的使⽤
7.5.1除了少数例外，药理学分光光度测试和化验呼吁与美国药典参考标准进⾏⽐较。这是为了确保在试验样品和参⽐物质相同的条件下进⾏测量。这些条件包括波长设置、狭缝宽度调整、单元放置和校正以及透射率⽔平。应当注意，在给定波长处具有相同透射率的单元在其他波长处的透射率可能显著不同。应建⽴适当的细胞校正，并在需要时使⽤。7.5.2在涉及分光光度法的测试和化验中使⽤的表达式“类似制剂”和“类似溶液”表明，参考样品，通常是USP参考标准，应以与⽤于所有实际⽬的相同的⽅式制备和观察。试件。通常，在配制指定参考标准的溶液时，制备⼤约(即在10％以内)所需浓度的溶液，并根据所称量的准确量计算吸收率；如果参考标准的先前⼲燥的样品尚未使⽤的吸光度是根据⽆⽔的基础计算的。
7.5.3在涉及分光光度法的测试和化验中使⽤的表达式“伴随测定”和“伴随测量”表明，包含测试样品的溶液和包含参考样品的溶液相对于指定TES的吸光度。T空⽩，⽴即测量。
7.6仪器
7.6.1许多类型的分光光度计是可⽤的。基本上，除了⽤于IR分光光度测定的那些之外，⼤多数类型都提供以适当形式通过样品的基本单⾊辐射能，并测量透射分数的强度。傅⾥叶变换红外分光光度计使⽤⼲涉技术，多⾊辐射通过分析物并根据强度和时间到达检测器。紫外、可见和⾊散红外分光光度计包括能源、⾊散装置(例如，棱镜或光栅)、⽤于选择波长带的狭缝、测试样品的电池或保持器、辐射能量检测器以及相关的放⼤器和测量装置。在⼆极管阵列分光光度计中，来⾃光源的能量通过测试样品，然后通过光栅分散到⼏百个光敏⼆极管上，每个光敏⼆极管在其⼩的波长间隔上产⽣与光⼦数量成⽐例的信号；然后可以在快速选择的时间间隔计算LS以表⽰完整的频谱。傅⾥叶变换红外系统利⽤⼲涉仪代替⾊散装置和数字计算机来处理光谱数据。有些仪器是⼿动操作的，⽽其他仪器则是⾃动和连续记录的。与数字计算机连接的仪器还具有共同添加和存储光谱、进
⾏光谱⽐较以及执⾏差分光谱(通过使⽤数字吸光度减法完成)的能⼒。
7.6.2仪器可⽤于可见光、可见光和紫外光、可见光、紫外和近红外以及光谱的红外区域。分光光度分析的类型和所⽤仪器的选择取决于诸如可⽤测试样品的组成和数量、所需的准确度、灵敏度和选择性
以及处理样品的⽅式等因素。
7.6.3⽤于原⼦吸收分光光度计的装置具有⼏个独特的特征。对于要确定的每个元素，应该选择发射被吸收的谱线的特定源。光源通常是空⼼阴极灯，阴极被设计成在激发时发射所需的辐射。由于试样元件吸收的辐射波长通常与其发射线的波长相同，所以空⼼阴极灯中的元件与待测元件相同。该设备配备有抽吸器，⽤于将测试样品引⼊⽕焰，⽕焰通常由空⽓-⼄炔、空⽓-氢⽓提供，或者，对于难熔情况，由⼀氧化⼆氮-⼄炔提供。实际上，⽕焰是⼀个被加热的样品室。检测器⽤于读取来⾃腔室的信号。⽕焰在燃烧过程中产⽣的
⼲扰辐射可以通过使⽤⼀定频率的斩波源灯信号来抵消。检测器应调谐到这个交流电流频率，以便忽略⽕焰产⽣的直流信号。因此，检测系统只读取来⾃空⼼阴极源的信号变化，该信号变化与测试样品中待测定的原⼦数成正⽐。为了药物学的⽬的，通常需要在吸收单位中直接提供读数的仪器。然⽽，如果根据需要修改各个专著中提供的计算公式以产⽣所需的定量结果，则可以使⽤提供百分透射率、百分吸收率或浓度读数的仪器。吸收百分⽐或透射率百分⽐可以通过以下两个⽅程转换为吸光度A：
A= 2-log10(100-% absorption)或者A=2-log10(% transmittance)
根据所使⽤的设备的类型，读出设备可以是仪表、数字计数器、记录器或打印机。单束和双束仪器都是市售的，任何⼀种都是合适的。
7.6.4荧光强度的测量可以⽤简单的滤光⽚荧光计进⾏。该仪器由辐射源、⼀次滤光⽚、样品室、⼆次滤光⽚和荧光检测系统组成。在⼤多数这样的荧光计中，检测器被放置在轴上，从激发光束的90处。这种直⾓⼏何结构允许激发的辐射通过测试样品，并且不污染荧光检测器接收的输出信号。然⽽，由于溶液本⾝的固有散射特性，或者如果存在灰尘或其他固体，探测器不可避免地接收到⼀些激发辐射。过滤器被⽤来消除这种残余散射。初级滤光⽚选择能够激发测试样品的短波长辐射，⽽次级滤光⽚通常是⼀个锐利的截⽌滤光⽚，它允许传输较长波长的荧光，但是阻挡散射的激发。
7.6.5⼤多数荧光计使⽤光电倍增管作为检测器，其中许多类型是可⽤的，每⼀种在最⼤灵敏度、增益和电噪声的光谱区域⽅⾯具有特殊的特性。光电流被放⼤并在仪表或记录器上读出。
7.6.6分光荧光计与滤光荧光计的不同之处在于，滤光⽚由棱镜或光栅类型的单⾊仪代替。为了分析⽬的，分光荧光计在波长选择性、灵活性和⽅便性⽅⾯优于滤光荧光计，同样地，分光光度计优于滤光光度计。
7.6.7许多辐射源是可⽤的。汞灯相对稳定，主要以离散波长发射能量。钨灯在可见光区域提供能量连续体。⾼压氙弧灯常⽤于分光荧光计，因为它是⼀种⾼强度光源，发射从紫外到红外的能量连续体。
7.6.8在荧光分光光度计中，单⾊器配有狭缝。狭缝提供⾼分辨率和光谱纯度，⽽⼤缝牺牲这些⾼灵敏度。狭缝尺⼨的选择取决于激发波长和发射波长的分离以及所需的灵敏度。
7.6.9在荧光测量中使⽤的样品细胞可以是圆管或矩形细胞，类似于吸收分光光度测定中使⽤的样品细胞，只是它们在所有四个垂直侧⾯上都抛光。⼀个⽅便的测试样品尺⼨是2到3mL，但是⼀些仪器可以装有100到300L的⼩电池，或者装有⼀个⽑细管保持器，需要更⼩数量的样品。
7.6.10光散射仪器可⽤，⼀般由汞灯组成，带有⽤于强绿线或蓝线的滤光⽚，快门，⼀组具有已知透射率的中性滤光⽚，以及安装在臂上的敏感光电倍增管，所述臂可以围绕溶液池旋转。D以任何⾓度从-135°到0°到+135°，由⼀个表盘外的轻便外壳。溶液池的形状多种多样，如测量90°散射的正⽅形，45°、90°和135°散射的半⼋⾓形，以及所有⾓度散射的圆柱形。由于分⼦量的测定需要精确测量溶液和溶剂之间的折射率差，[(n-n0)/c]，所以需要第⼆种仪器，即差⽰折射仪来测量这个⼩的差异。折流板除雾器
7.6.11拉曼光谱仪包括以下主要部件：强单⾊辐射源（通常为激光器）；收集被测试样品散射光的光学元件；分散散射光并抑制强⼊射频率的（双）单⾊器；以及合适的E光检测放⼤系统。拉曼测量是简单的，因为⼤多数标本直接检查在熔点⽑细管。因为激光源可以被强烈地聚焦，所以只需要⼏微升的样品。
7.7过程：
7.7.1吸收分光光度法
7.7.1.1操作分光光度计的详细说明由制造商提供。为了获得显著和有效的结果，分光光
度计的操作者应该意识到它的局限性和潜在的误差和变化源。操作说明书应严格遵守，如仪器的护理、清洁和校准，以及处理吸收池的技术，以及操作说明。以下⼏点需要特别强调。
检查仪器的校准精度。在使⽤连续辐射能量源的情况下，应注意波长和光度标度；在使⽤谱线源的情况下，仅需检查光度标度。许多辐射能量源具有适当强度的光谱线，在选定的整个光谱范围内适当间隔。紫外和可见校正光谱的最佳单源是⽯英-汞弧，可以使⽤253.7、302.25、313.16、334.15、365.48、404.66和435.83nm的线。玻璃汞弧同样适⽤于300纳⽶以上。还可以使⽤氢放电灯的48 613 nm和65 62nm的线。波长标度也可以通过合适的玻璃滤光⽚来校准，这些滤光⽚在可见光和紫外光
区域具有有⽤的吸收带。含镝（镨和钕的混合物）的标准玻璃已被⼴泛使⽤，尽管含钬玻璃被发现是优越的。标准氧化钬溶液已经取代了钬玻璃的使⽤。1近红外和红外分光光度计的波长标度很容易⽤聚苯⼄烯薄膜、⼆氧化碳、⽔蒸⽓或氨⽓提供的吸收带来检查。
7.7.1.2为了检查光度尺，有许多标准⽆机玻璃滤光⽚以及已知透射率的标准溶液，如重铬酸钾。定量吸收测量通常是在液体保存细胞中的物质溶液上进⾏的。由于溶剂和电池窗⼝都吸收光，所以必须补偿它们对测量吸光度的贡献。匹配的细胞可⽤于紫外和可见分光光度法，不需要细胞校正。然⽽，在IR分光光度法中，通常必须对细胞差异进⾏校正。在这种情况下，⽤选定的溶剂填充成对的细胞，并确定它们在选定波长下的吸光度差异。表现出更⼤吸光度的细胞⽤于测试样品的溶液，通过减去细胞差异来校正所测量的吸光度。
7.7.1.3使⽤计算机化傅⽴叶变换红外系统，不需要进⾏这种校正，因为相同的电池可⽤于溶剂空⽩和测试溶液。然⽽，必须确定电池的传输特性是恒定的。
7.7.1.4测试样品与标准样品的⽐较最好在有关化合物的光谱吸收峰值进⾏。测定处⽅分光光度法给出了有关物质峰光谱吸收的通常接受波长。众所周知，不同的分光光度计在该峰的表观波长上可能表现出微⼩的变化。好的实践要求在峰值吸收发⽣的波长进⾏⽐较。如果该波长与个别专著中规定的波长相差⼤于±1nm，则可指⽰仪器的重新校准。
7.7.1.5测试准备：⽤UV或可见分光光度法测定，样品⼀般溶于溶剂中。除⾮在专著中另有指⽰，否则在室温下使⽤1厘⽶的路径长度进⾏测定。许多溶剂适⽤于这些范围，包括⽔、醇、氯仿、低级烃、醚和强酸和碱的稀溶液。在使⽤光谱区域时，应注意使⽤⽆污染物吸收的溶剂。通常建议使⽤⽆⽔甲醇或⼄醇，或通过加⼊甲醇⽽变性但不含苯或其他⼲扰杂质的醇作为溶剂。具有特殊分光光度质量的溶剂，保证不含污染物，可从⼏种来源商业获得。⼀些其他分析试剂级有机溶剂可能含有痕量杂质，在紫外区域强烈吸收。应检查新批量的这些溶剂的透明度，并注意使⽤相同批量的溶剂制备试验溶液和标准溶液以及空⽩溶液。
在近红外和红外光谱中，没有明显厚度的溶剂是完全透明的。四氯化碳（厚度为5毫⽶）对6µm（1666 cm-1）实际上是透明的。⼆硫化碳（厚度1mm）适合作为40 µm (250 cm-1)的溶剂，但4.2µm ⾄ 5.0µm（2381cm-1⾄2000cm-1）和5.5µm⾄
7.5µm (1819cm-1⾄1333-cm-1）的吸收区域除外。其他溶剂具有相对较窄的透明区域。对于IR分光光度法，⼀个合适的溶剂的附加条件是它不能影响制造电池的材料，通常是氯化钠。试验样品也可以通过将细碎的固体样品分散在矿物油中或与之前⼲燥的卤化碱盐（通常是溴化钾）密切混合来制备。与碱卤化物盐的混合物可以直接检查，或者作为通过在模具中压制混合物⽽获得的透明圆盘或球团检查。溴化钾的典型⼲燥条件是105°在真空下⼲燥12⼩时，尽管市⾯上可以买到不需要⼲燥的品种。在碱卤化物与测试样品之间发⽣歧化时，优选采⽤红外显微镜或矿物油分散体。对于合适的材料，测试样品可以整齐地制备成⽤于红外显微镜的薄样品，或者悬浮整齐地制备成⽤于矿物油分散的薄膜。对于拉曼光谱，最常见的溶
剂是合适的，并且可以使⽤普通的（⾮荧光）玻璃标本细胞。电磁波谱的红外区从0.8到400 µm，从800到2500nm（0.8到2.5µm）⼀般认为是近红外区，从2.5到25 µm（4000到400 cm-1）⼀般认为是中红外区，从25到400µm⼀般认为是中红外区。被认为是远红外（FIR）区域。除⾮个别专著中另有规定，否则应使⽤3800⾄650 cm-1 (2.6⾄15µm)的区域来确定是否符合专著规定的IR吸收。
在单个专著中给出IR线谱的值的情况下，字母s、m和w分别表⽰强、中和弱吸收；sh 表⽰肩，bd表⽰带，v表⽰⾮常。根据所使⽤的特定仪器，这些值可以变化多达0.1µm 或10 cm-1。多态性引起了许多化合物在固态中的红外光谱的变化。因此，在进⾏IR吸收试验时，如果分析物和标准的红外光谱出现差异，将等量的试验物质和标准物溶解在等体积的适当溶剂中，在相同的容器中蒸发溶液⾄⼲燥。条
件，并重复对残留物进⾏测试。在近红外光谱中，许多当前的兴趣集中在易于分析的问题上。样品可以以粉末形式或通过反射技术进⾏分析，很少或不需要准备。通过计算机将光谱与以前从参考材料获得的光谱进⾏⽐较，可以确定符合内部规范。许多药物材料在这个光谱区域表现出低的吸收率，这使得⼊射的近红外辐射⽐紫外、可见或红外辐射更深⼊地穿透样品。近红外分光光度法可⽤于观察基质的改变，并且通过适当的校准，可⽤于定量分析。
在原⼦吸收分光光度法中，必须特别考虑溶剂的性质和固体的浓度。理想的溶剂是在吸收或发射过程中⼲扰最⼩的溶剂和在⽕焰中产⽣中性原⼦的溶剂。如果测试溶液与标准溶液的表⾯张⼒或粘度有显著差异，则溶液以不同的速率被吸⼊或雾化，导致产⽣的信号有显著差异。溶液中的酸浓度也影响吸收过程。因此，⽤于制备测试样品和标准的溶剂在这些⽅⾯应该尽可能相同或尽可能相似，并且应该产⽣容易通过燃烧器-抽吸器的样品管抽吸的溶液。由于溶液中存在的不溶性固体可能引起基体或体积⼲扰，所有溶液中的总不溶性固体含量应尽可能保持在2％以下。
7.7.1.6计算
7.7.1.6.1吸收分光光度法在测定或试验中的应⽤通常需要使⽤参考标准。在测定中指定这样的测量时，提供公式以允许计算期望的结果。公式中经常包含⼀个数值常数。提供以下推导，以介绍在许多专著的分析中公式中出现的常数的推导的逻辑⽅法。⽐尔定律关系对于参考标准（S）和试验样品（U）的解都是有效的：
A S=abC S(1)
A U=abC U(2)琴谱架
其中A S是浓度C S的标准溶液的吸收度，A U是浓度C U的测试样品溶液的吸收度。如果C S和 C U 以相同的单位表⽰，并且在具有相同尺⼨的匹配单元中测量两种溶液的吸收率，则吸收率a和单元厚度b相同；因此，可以组合并重写这两个⽅程以求
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