一、目的
为规范ABO和RhD血型鉴定(微柱凝胶卡式法)的技术操作,保证鉴定结果准确即临床输血安全有效。 二、适用范围
适用于微柱凝胶卡式法进行ABO和RhD血型鉴定。
三、原理
红细胞血型抗原—抗体反应体系在微柱凝胶卡微孔上端反应室反应后,如红细胞血型抗原与相应特异性抗体发生凝集反应后,离心后被排阻在具有三维空间网状结构的凝胶表层或者颗粒间隙之中,不能通过凝胶筛网,而未发生抗原—特异性抗体凝集的红细胞则可以通过凝胶筛网沉降至微柱凝胶底部。 四、步骤和方法
1,取微柱凝胶ABO血型鉴定检测卡放入专用离心机,3000r/min离心1min后撕开锡纸膜,正立放置待用。
2,用微量移液器在A、B、D、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液,在无心磨床调机方法Ac、Bc微孔中各加入受检者血清(血浆)50微升,再分别加入1%A、B型试剂红细胞悬液50微升。
3,将准备就绪的检测卡静止3分钟使其充分反应后,用专用离心机以1800r/min·2min,2500r/min·1min离心后,取出判断结果。
4,判断标准如下表
阳性 | 4+ | RBC绝大部分凝聚于凝胶表层 |
雪芙蓉冰车3+ | RBC多数凝聚于凝胶表层,少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶表层 |
2+ | RBC部分沉积于胶底,部分RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中 |
1+ | RBC多数沉积于胶底,可见少数RBC凝集颗粒悬浮于凝胶中 |
+/- | RBC绝大多数沉积于胶底,极少数RBC凝集颗粒悬浮于近胶底 |
dcp | 混合凝集外观,部分RBC凝集颗粒位于凝胶表层,部分玻璃模具设计RBC沉于胶底 |
PH | 部分溶血,凝胶管中液体呈清澈透明红,凝胶中有残留RBC |
H | 柔性电路 完全溶血,凝胶管中液体呈清澈透明红,凝胶中无RBC |
阴性 | — | RBC全部沉积于胶底 |
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结果判读:如Ctrl微孔为阴性:A、B、D各微孔阳性表明受检红细胞表达相应抗原,Ac、Bc微孔阳性表明受检者血清(血浆)存在抗-A或者抗-B;若各微孔阴性,则结果相反;结合反应格局判读血型结果。若Ctrl微孔为阳性,结果不可信,重新试验。
5,Rh血型分型:
5.1取Rh血型分型微柱凝胶卡放入专用离心机,3000r/min离心1min后撕开锡纸膜,正立放置待用。
5.2使用微量移液器在C、c、D、E、去污剂e、Ctrl微孔中分别加入50微升受检者1%红细胞悬液。
5.3pstang将检测卡静止3分钟使其充分反应后放入专用离心机按上述条件离心后观察结果。
5.4判断规则见上表:
结果判定:如Ctrl微孔为阴性,C、c、D、E、e微孔中阳性结果表示受检者红细胞表达相应的血型抗原,反之则不表达相应的血型抗原。若Ctrl微孔为阳性,结果不可信,重新试验。
五、质量控制:
微柱凝胶试剂卡在有效期内使用,试验过程设置阴性,阳性对照。试剂红细胞也应在有效期内使用,并定期检查有无凝块和溶血等质量问题。
六、注意事项:
1,检测卡若在冰箱储存,使用前须放置实验室5—10min平衡至室温。
2,撕开微柱凝胶卡锡纸膜时,注意避免各微柱间特异性抗体试剂的交叉污染。
3,细菌污染,纤维蛋白析出及抗凝不佳的血,可产生假阳性结果,建议使用血清。
4,严格遵循离心力,离心时间要求,离心速度过快,离心时间过长均易产生假阴性结果。
5,由于试剂生产厂家,批号不同等因素,红细胞浓度,吸取样品的量及离心条件等环节要求有所差异,以试剂说明书为准。