(19)中华人民共和国国家知识产权局
无叶片风扇
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710499848.7
(22)申请日 2017.06.27
(71)申请人 中国药科大学
地址 210009 江苏省南京市鼓楼区童家巷
24号
电源转换电路(72)发明人 郑枫 柳文媛 周洁 冯锋
(74)专利代理机构 南京天华专利代理有限责任
公司 32218
代理人 徐冬涛 邢贤冬
(51)Int.Cl.
G01N 30/02(2006.01)
G01N 30/06(2006.01)黑碟
(54)发明名称
(57)摘要
本发明公开了一种衍生化HPLC-UV法测定甲
磺酸中甲磺酸酯的方法，该方法使用二硫代氨基
甲酸盐类衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化后生成
为进样样品，基于反相高效液相谱法的原理在
紫外光区分离并测定甲磺酸酯的衍生化产物，从
于甲磺酸酯与二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂
反应后生成产物具有紫外吸收特性，建立了一种
简单、通用的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲
磺酸酯的方法。方法学验证的结果显示该方法专
属性和灵敏度良好。权利要求书2页 说明书11页 附图2页CN 107515257 A 2017.12.26
C N 107515257
A
1.一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于该方法使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化生成在紫外光区272-284nm有较强吸收的衍生化产物，利用HPLC反相分配谱法在紫外光区272-284nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸酯的定性或定量检测。
2.根据权利要求1所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)、用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80-100℃条件下，使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化反应生成在紫外光区272-284nm有较强的吸收的产物；
(2)、利用HPLC-UV法，基于反相分配谱法原理在紫外光区272-284nm测定步骤(1)中获得的甲磺酸酯衍生化产物，从而实现对甲磺酸酯的定性或定量检测。
3.根据权利要求2所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于所述的甲磺酸酯为烷基取代的甲磺酸酯，优选为甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯中的任意一种；所述的二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂为二乙基二硫代氨基甲酸钠、二苄基二硫代氨基甲酸钠和乙基黄原酸钾中的任意一种；所述的反应体系为N,N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜。
4.根据权利要求2所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于所述的衍生化反应的条件：以N,N-二甲基乙酰胺为反应体系，以二乙基二硫代氨基甲酸钠为衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7，在80℃条件下进行衍生化反应；其中，二乙基二硫代氨基甲酸钠浓度为0.2-2mg/mL，优选为0.2mg/mL，反应时间为1-5h，优选为1h。
5.根据权利要求2所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-UV法：采用HPLC谱仪；采用反相分配谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于272-284nm、优选为275-277nm、进一步优选为277nm；
所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相谱仪，该谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution谱工作站；谱柱采用250mm×4.6mm,5μm的GL Sciences IntertSustain C18柱；进样量：20μL；流动相流速：1.0mL/min；流动相梯度：A相为乙腈，B相为5mmol/L乙酸铵，0min 60％A相，16min 60％A 相，21min 80％A相，26min 80％A相，27min 60％A相，34min 60％A相；柱温：30℃；检测波长：277nm。
鬼屋道具6.权利要求1-5中任一项所述的方法在测定甲磺酸中甲磺酸酯中的应用。
7.一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法，其特征在于包含以下步骤：
(1)、取甲磺酸样品，水：乙腈混合溶液溶解后加入反应体系中，用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80℃-100℃条件下，使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂进行衍生化反应1-5h获得反应液；
测试网页游戏
(2)、以步骤(1)中衍生化反应结束后的反应液作为进样样品，利用HPLC-UV法在272-284nm测定其中甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸中甲磺酸酯的定性或定量检测。
8.根据权利要求7所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法，其特征在于所述的甲磺酸酯为烷基取代的甲磺酸酯，优选为甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯中的任意一种；所述的二硫代氨基甲酸盐
类衍生化试剂为二乙基二硫代氨基甲酸钠、二苄基二硫代氨基甲酸钠和乙基黄原酸钾中的任意一种；所述的反应体系为N,N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜。
9.根据权利要求7或8所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法，其特征
在于所述的衍生化反应的条件：以N,N-二甲基乙酰胺为反应体系，以二乙基二硫代氨基甲酸钠为衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7，在80℃条件下进行衍生化反应；其中，二乙基二硫代氨基甲酸钠浓度为0.2mg/mL，反应时间为1h。
10.根据权利要求7所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法，其特征在于步骤(2)中所述的HPLC-UV法采用HPLC谱仪；采用反相分配谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于272-284nm、优选为275-277nm、进一步优选为277nm；
所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相谱仪，该谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution谱工作站；谱柱采用250mm×4.6mm,5μm的GL Sciences IntertSustain C18柱；进样量：20μL；流动相流速：1.0mL/min；流动相梯度：A相为乙腈，B相为5mmol/L乙酸铵，0min 60％A相，16min 60％A 相，21min 80％A相，26min 80％A相，27min 60％A相，34min 60％A相；柱温：30℃；检测波长：277nm。
衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法
技术领域
[0001]本发明属于药品分析检测领域，涉及一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，尤其涉及一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法。
背景技术
防辐射手机[0002]潜在基因毒性杂质(potential genotoxic impurities)是强致突变剂和致癌剂，能够引起 DNA突变、染体断裂或者DNA重组，还可能导致人类肿瘤的发生[1,2]。近几年来，随着基因毒性杂质法规的逐步完善，美国食品和药物管理局(FDA)和欧洲药物管理局(EMEA)等部门对基因毒性杂质的监管要求越来越高[3,4]。药物中基因毒性杂质如果控制不当，可能会导致临床隐患，同时也会影响新药上市时间，因此，在药物生产过程中，对于潜在基因毒性杂质的控制十分重要[5,6]。
[0003]甲磺酸酯是一类常见的潜在基因毒性杂质，近年来越来越受到药品监管部门的关注，这主要与2007年罗氏公司生产的泛罗赛因含过量甲磺酸乙酯而被从欧洲市场撤市有关[7-10]。经调查，泛罗赛中残留的甲磺酸乙酯主要来源是原料甲磺酸中含有的甲磺酸乙酯残留[11]。在药物合成过程中，甲磺酸常作为平衡离子被用来进行成盐反应，而这类成盐反应一般都在药品生产的最后一步[12,13]，因此
甲磺酸中残留的甲磺酸酯是原料药中甲磺酸酯的主要来源[14,15]。甲磺酸甲酯(MMS)和甲磺酸乙酯(EMS)是两种常见的甲磺酸酯基因毒性杂质，欧洲药典8.0收载了气相谱-质谱(GC-MS)法用于检测甲磺酸中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的标准方法，该方法需要将待测物衍生化成可挥发性的碘代烷烃，然后液液萃取，方能进行分析[16-18]。而其他常见的用于测定甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯的方法大多数也都是基于质谱方法，虽然质谱检测器是一种灵敏和通用的检测器，然而高昂的价格限制了它的广泛使用[2,5,19-23]。
[0004]高效液相谱-紫外检测(HPLC-UV)法是药物质量控制的常用手段，开发一种简单、灵敏、稳定的HPLC-UV法用于甲磺酸中甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯具有重要意义。然而该方法的开发面临一个重要挑战，即甲磺酸酯缺乏能用于紫外检测的发基团，因此我们希望通过液相衍生化技术，利用亲核取代反应，引入发基团来解决这个问题。三乙胺和被报道作为衍生化试剂用于液相谱-质谱(LC-MS)法和毛细管谱-质谱(CE-MS)法测定甲磺酸酯的含量[19-21]。然而，这些衍生化试剂的产物(季铵盐)由于硅羟基作用会造成拖尾现象，降低检测灵敏度。五氟硫酚和硫氰酸盐是强亲核试剂，被用作衍生化试剂用于气相谱-质谱(GC-MS)法测定甲磺酸酯含量[22,23]。但五氟硫酚极易氧化，用于HPLC检测，会产生干扰。而硫氰酸盐衍生化会产生多种衍生化产物，导致低灵敏度。
发明内容
[0005]本发明的目的是针对现有技术的不足，提供衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法。
[0006]本发明的另一目的是提供衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法。
[0007]本发明的目的可通过如下技术方案实现：
[0008]一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，包括：使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化生成在紫外光区272-284nm有较强的吸收的衍生化产物，利用 HPLC反相分配谱法在紫外光区272-284nm测定甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸酯的定性或定量检测。
[0009]优选的，所述的衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸酯的方法，包含以下步骤：[0010](1)、用氢氧化钠调节反应体系pH到7-8，在80-100℃条件下，使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂对甲磺酸酯衍生化反应生成在紫外光区272-284nm有较强的吸收的产物；[0011](2)、利用HPLC-UV法，基于反相分配谱法原理在紫外光区272-284nm测定步骤 (1)中获得的甲磺酸酯衍生化产物，从而实现对甲磺酸酯的定性或定量检测。
[0012]所述的甲磺酸酯为烷基取代的甲磺酸酯，优选为甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯中的任意一种。
[0013]所述的二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂选自二乙基二硫代氨基甲酸钠、二苄基二硫代氨基甲酸钠和乙基黄原酸钾中的任意一种，优选为二乙基二硫代氨基甲酸钠，二乙基二硫代氨基甲酸钠与甲磺酸酯衍生化生成在紫外光区275-277nm有较强吸收的衍生化产物。
[0014]所述的反应体系为N,N-二甲基乙酰胺或二甲亚砜，优选为N,N-二甲基乙酰胺。[0015]优选的，所述的衍生化反应的条件：以N,N-二甲基乙酰胺为反应体系，以二乙基二硫代氨基甲酸钠为衍生化试剂，用氢氧化钠调节反应体系pH到7，在80℃条件下进行衍生化反应；其中，二乙基二硫代氨基甲酸钠浓度为0.2-2mg/mL，优选为0.2mg/mL，反应时间为1-5h，优选为1h。
[0016]所述的HPLC-UV法：采用HPLC谱仪；采用反相分配谱法；以非极性键合相为固定相，采用极性流动相，检测波长位于272-284nm、优选为275-277nm、进一步优选为277 nm。[0017]优选的，所述的HPLC-UV法使用的仪器为Shimadzu LC 20AT液相谱仪，该谱仪配置有在线真空脱气机、二元梯度泵，自动进样器、柱温箱、DAD检测器和LC-solution谱工作站；谱柱采用250mm×4.6mm,5μm的GL Sciences IntertSustain C18柱；进样量： 20μL；流动相流速：1.0mL/min；流动相梯度：A相为乙腈，B相为5mmol/L乙酸铵溶液，0min 60％A相，16min 60％A相，21min 80％A相，26min 80％A相，27min 60％A 相，34min 60％A相；柱温：30℃；检测波长：277nm。
[0018]本发明所述的方法在用于甲磺酸样品中甲磺酸酯的定性与定量检测的应用。[0019]一种衍生化HPLC-UV法测定甲磺酸中甲磺酸酯的方法，包含以下步骤：
[0020](1)、取甲磺酸样品，水：乙腈混合溶液溶解后加入反应体系中，用氢氧化钠调节反应体系pH到
7～8，在80℃～100℃条件下，使用二硫代氨基甲酸盐类衍生化试剂进行衍生化反应1-5h获得反应液；
[0021](2)、以步骤(1)中衍生化反应结束后的反应液作为进样样品，利用HPLC-UV法在272-284nm测定其中甲磺酸酯的衍生化产物，从而实现对甲磺酸中甲磺酸酯的定性或定量检测。
[0022]所述的甲磺酸酯选自烷基取代的甲磺酸酯，优选为甲磺酸甲酯和甲磺酸乙酯中的任意一种。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议