ISO15189体系下全自动血凝分析仪的3Q验证

2021年3月第11卷第5期·器械与设备·ISO15189体系下全自动血凝分析仪的3Q验证莎　仁1　　梁　鱼21.内蒙古自治区巴彦淖尔市医院检验科，内蒙古巴彦淖尔 015000；2.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特 010110[摘要] 目的 以SysmexCS-2500全自动血凝分析仪为例，探究医学实验室质量和能力认可准则体系（ISO15189）下全自动血凝分析仪的3Q验证过程。 方法 严格按照ISO15189的要求，对SysmexCS-2500全自动血凝分析仪器的凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶时间（TT）、纤维蛋白原（FIB）、D-二聚体五个指标进行批内精密度、日间精密度、准确性、线性范围、检测下限（灵敏度）、携带污染率性能验证。 结果 批内精密度：PT、APTT、TT、FIB、D-二聚体的正常质控CV值分别为0.34%、0.38%、0.62%、1.04%、3.32%；PT、APTT、FIB、D-二聚体的异常质控CV值分别为0.47%、0.41%、2.56%、9.70%；日间精密度：PT、APTT、TT、FIB、D-二聚体的正常质控CV值分别为2.81%、2.15%、3.72%、3.51%、5.67%；PT、APTT、FIB、D-二聚体异常质控CV值分别为2.21%、2.77%、4.40%、5.37%；准确性：PT、APTT、FIB、TT正常质控水平测试结果分别为12.1、25.6、2.71、19.7；PT与FIB异常质控水平测试结果为19.9、0.89；D-二聚体低值重复三次测试结果分别为0.28、0.29、0.29；D-二聚体高值重复三次测试结果分别为2.20、2.22、2.21；FIB与D-二聚体线性范围验证结果a值分别为0.9535、1.0162，R2分别为0.9911、0.9975；灵敏度：D-二聚体与FIB的CV值分别为3.48%与2.57%；携带污染率最高值为2.65%。所有验证结果均符合要求，验证合格。 结论 通过ISO15189体系下的3Q验证，SysmexCS-2500全自动血凝分析仪的主要性能均符合要求，可用于临床凝血检测等工作。[关键词] ISO15189；血凝分析仪；3Q验证；SysmexCS-2500；医学实验室[中图分类号] R446.1　　　[文献标识码] A　　　[文章编号] 2095-0616（2021）05-0237-04Research on the 3Q validation of automatic blood coagulation analyzer

under ISO15189 systemSHA　Ren　　LIANG　ment of Clinical Laboratory, Bayannur Hospital, Inner Mongolia, Bayannur 015000, China; Mongolia Medical

University, Inner Mongolia, Hohhot 010110, China[Abstract] Objective To investigate the 3Q validation process of automatic blood coagulation analyzer under

Accreditation Criteria for the Quality and Competence of Medical Laboratories (ISO15189), by taking SysmexCS-2500

automatic blood coagulation analyzer as an example. Methods In strict accordance with the requirements of ISO15189,

five indexes of SysmexCS-2500 automatic blood coagulation analyzer, namely, prothrombin time (PT), activated partial

thromboplastin time (APTT), thrombin time (TT), fibrinogen (FIB) and D-dimer, were verified for performance on within-batch precision, inter-day precision, accuracy, linear range, lower limit of detection (sensitivity) and residual contamination

rate. Results In terms of within-batch precision, the normal quality control CV values of PT, APTT, TT, FIB and D-dimer

were 0.34%, 0.38%, 0.62%, 1.04% and 3.32%, respectively. The abnormal quality control CV values of PT, APTT, FIB

and D-dimer were 0.47%, 0.41%, 2.56% and 9.70%, respectively. In terms of inter-day precision, the normal quality

control CV values of PT, APTT, TT, FIB and D-dimer were 2.81%, 2.15%, 3.72%, 3.51% and 5.67%, respectively. The

abnormal quality control CV values of PT, APTT, FIB and D-dimer were 2.21%, 2.77%, 4.40% and 5.37%, respectively.

In terms of accuracy, the test results of normal quality control level of PT, APTT, FIB and TT were 12.1, 25.6, 2.71 and

19.7 respectively. The abnormal quality control levels of PT and FIB were 19.9 and 0.89 respectively. The lower limit

value of D-dimer was repeated three times, and the results were 0.28, 0.29 and 0.29 respectively. The higher limit value

of D-dimer was repeated three times, and the results were 2.20, 2.22 and 2.21 respectively. The value of linear range

validation results of FIB and D-dimer were 0.9535 and 1.0162 respectively, and R2 was 0.9911 and 0.9975 respectively. In

terms of sensitivity, CV values of D-dimer and FIB were 3.48% and 2.57% respectively. The highest limit value of residual

contamination rate was 2.65%. All validation results met the requirements and pass the validation. Conclusion Through

the 3Q validation under ISO15189 system, the main performance of SysmexCS-2500 automatic blood coagulation analyzer

meets the requirements and can be applied for the clinical blood coagulation detection work.

[Key words] ISO15189; Blood coagulation analyzer; 3Q validation; SysmexCS-2500; Medical laboratory

CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.11 No.5 March 2021237

·器械与设备·随着凝血检测项目在临床的不断发展，临床以及相关领域对凝血检测结果的准确性和凝血检测效率的要求越来越高[1]。因此，为确保检测数据的准确可靠，在ISO15189体系下对医学实验室仪器设备进行3Q验证非常有必要。3Q验证即IQ、OQ和PQ，其中最关键的步骤为PQ即性能验证，要求验证频率是每年一次[2]。ISO15189体系也要求实验室新仪器在安装和应用于临床检测前应对其性能指标进行验证[3-5]，这都是保证检测过程每个环节质量的重要手段[6]。美国FDA也有同样的规定[7-8]。目前国内已有很多品牌的全自动凝血分析仪的性能验证报道[9-10]。以SysmexCS-2500全自动血凝分析仪为例，探究在15189体系下该全自动血凝分析仪的性能验证过程。1　材料与方法1.1　仪器与试剂[11]生产的仪器为日本希森美康公司（Sysmex） 2021年3月第11卷第5期要求D-二聚体低值、高值测定结果在厂家规定的允许范围内。1.2.4　线性范围　根据408-2012《临床化学设备[16]线性评价指南》选取一份接近预期上限的高值血浆样本（H），FIB、D-二聚体按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例进行稀释。每个稀释度重复测定2次，计算均值。计算y=ax+b，验证线性范围，需符合a值在1±0.05范围内，R2≥0.9801的要求。1.2.5　FIB、D-二聚体检测下限灵敏度　根据EP9-A3文件[17]连续测定接近理论低值水平血浆10次。结果需符合CV%＜20%。1.2.6　携带污染率1.2.6.1　PT、APTT、TT、FIB携带污染率　连续测定对倍稀释的正常血浆PT或APTT三次（j1、j2、j3）后，立即连续测定原血浆FIB或TT三次（i1、i2、i3），再连续测定血浆PT或APTT三次（j4、j5、j6）。根据下面公式计算PT、APTT、TT携带污染率CV值，要求均应≤10%。血浆中FIB的浓度要求在3～4 g/L。SysmexCS-2500全自动血凝分析仪；试剂为凝血酶原时间（PT）测定试剂盒（批号565631）、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定试剂盒（批号556969）、凝血酶时间（TT）测定试剂盒（批号556839）、纤维蛋白原（FIB）测定试剂盒（批号595024）、D-二聚体；质控品为正常凝血质控品：质控1（批号548087）和INNOOANCED-DIMERControl1（批号562243）；异常凝血质控品：质控P（批号562143）和INNOOANCED-DIMERControl2（批号556715）。1.2　方法1.2.1　批内精密度　根据《临床血液学检验常规[12]项目分析质量要求》、《D-二聚体定量检测》文1.2.6.2　D-二聚体、FDP携带污染率1.2.6.2.1　高值样本对低值样本的污染率　低值样本置样本架1和3位置，高值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。计算：K1=[N4-Mean（N1，N2，N3）]/Mean（N1，N2，N3）。计算结果K1应≤10.0%。1.2.6.2.2　低值样本对高值样本的污染率 高值样本置样本架1和3位置，低值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。计算：K2=[A4-Mean（A1，A2，A3）]/Mean（A1，A2，A3）。计算结果K2应≤10.0%。1.3　统计学处理采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理。计算的各检验指标性能验证结果的CV值用百分数的形式表示。2　结果2.1　批内精密度批内精密度正常质控和异常质控CV值均符合厂家要求，验证合格。见表1～2。件[13]选取2个浓度水平高低值样本，连续重复测定11次，计算变异系数（CV），标准差（SD）。要求计算CV值需≤厂家要求。1.2.2　日间精密度　根据CLSI EP15-A3文件[14]选取两个水平质控品，每天取出两个水平的样品各一份测定一次，共测定20 d，计算CV，SD。要求计算CV值需≤厂家要求。1.2.3　准确性1.2.3.1　准确性（PT、APTT、TT、FIB）　根据CLSI

EP15-A3文件[15]取两个水平的血凝质控品进行测定，计算每份样本检测结果与靶值的相对偏差。以偏差为评价指标，要求计算的检测结果与靶值的偏差在厂家规定的允许范围内。1.2.3.2　准确性（D-二聚体）　根据EP15-A3文件[15]选取两个水平的定值质控品重复测定3次。238CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.11 No.5 March 2021

2021年3月第11卷第5期表1 　批内精密度正常质控水平验证结果参数MEANSDCV（%）PT（s）APTT（s）TT（s）FIB（g/L）12.380.040.3424.220.090.384.0015.370.090.6210.003.410.041.046.00D-二聚体（mg/L FEU）0.360.013.3215.00参数PTFIB·器械与设备·表6 　准确性异常质控水平验证结果测试结果19.90.89靶值19.50.86允许范围15.6～23.40.46～1.26偏差2.05%3.48%判定标准CV≤（%）3.002.3.2　准确性（D-二聚体）　D-二聚体检测结果与靶值的偏差符合要求，验证合格。见表7～8。表2 　批内精密度异常质控水平验证结果参数MEANSDCV（%）判定标准CV≤（%）D-二聚体PT（s）APTT（s）FIB（g/L）（mg/L FEU）24.380.110.478.0090.460.370.418.000.550.012.5612.007.270.719.7010.00表7 　D-二聚体低值准确度验证结果参数D-二聚体（mg/L FEU）重复次数测试结果靶值第一次第二次第三次0.280.290.29允许范围0.300.24～0.36 注：TT无异常质控，仅验证正常水平

表8 　D-二聚体高值准确度验证结果参数D-二聚体（mg/L FEU）重复次数测试结果靶值第一次第二次第三次

2.202.222.21允许范围2.2　日间精密度日间精密度正常质控和异常质控CV值均符合厂家要求，验证合格。见表3～4。表3 　日间精密度正常质控水平验证结果参数MEANSDCV（%）D-二聚体（mg/PT（s）APTT（s）TT（s）FIB（g/L）L FEU）12.840.362.8127.190.582.155.0021.160.793.727.502.520.093.516.670.280.025.6715.002.441.95～2.932.4　线性范围所得FIB与D-二聚体的线性验证回归方程均符合要求，验证合格。见图1～2。

判定标准CV≤（%）5.00表4 　日间精密度异常质控水平验证结果参数MEANSDCV（%）判定标准CV≤（%）PT（s）APTT（s）FIB（g/L）19.810.442.215.0065.361.812.775.000.920.044.406.67D-二聚体（mg/L FEU）2.330.125.3715.00图1 　验证FIB线性结果图 注：TT无异常质控，仅验证正常水平2.3　准确性2.3.1　准确性（PT、APTT、FIB、TT）　PT、APTT、FIB、TT检测结果与靶值的偏差均符合要求，验证合格。见表5～6。表5 　准确性正常质控水平验证结果参数PTAPTTFIBTT测试结果12.125.62.7119.7靶值11.525.62.5919.4允许范围10.1～12.922.5～28.72.29～2.8915.5～23.3偏差13.9%0.00%4.63%1.54%

图2 　D-二聚体线性结果图239

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·器械与设备·2.5　检测下限（灵敏度）FIB与D-二聚体检测结果CV值均符合要求。见表9。表9 　CS-2500灵敏度验证结果项目MEANSDCV（%）判定标准CV≤（%）FIB（g/L）0.550.012.5720.00D-二聚体（mg/L FEU）0.360.013.4820.00 2021年3月第11卷第5期标准物质的筛选[J].化学分析计量，2017，3：101-105.[3]胡婷婷，刘维薇.医学实验室质量和能力认可准则专用要求概述[J].临床检验杂志，2013，31（11）：867-871.[4]丛玉隆，邓新立.实验室ISO15189认可对学科建设的几点启示[J].中华检验医学杂志，2007，30（2）：128-131.[5]丛玉龙.临床实验室分析前质量管理及对策[J].中华检验医学杂志，2004，27（8）：483-484.[6]丛玉隆.GB/T22586：2008-/ISO15189：2007对检验医学学科建设的作用[J].中国医疗器械信息，2009，15（10）：1-3.[7]付晓敏，漆洪波.胎盘植入研究进展[J].中国实用妇科与产科杂志，2014，30（1）：24-30.[8]卢昊，樊军，王庆，等.SYSMEX CA-510全自动血凝分析仪性能验证及评价[J].国际检验医学杂志，2016，37（18）：2642-2643.[9]郑卫东，范小斌，唐红艳.STA-R全自动血凝分析仪性能评价[J].实用医学杂志，2005，21（5）：533-535.[10]马升俊.Stago STA-R全自动血凝分析仪性能验证与评价[J].国际检验医学杂志，2013，34（1）：91-93.[11]刘运端，林世恒，陈国添.Sysmex CS5100全自动血凝分析仪性能验证[J].血栓止血学，2017，23（6）：945-947.[12]陆红，李臣宾，周文宾，等.《临床血液学检验常规项目分析质量要求》的适用性评价[J].现代检验医学杂志，2014，29（3）：169-172.[13]刘军，王迪，赵国珍.D-二聚体的检测及其临床应用[J].河北医药，2009，31（7）：51-52.[14]徐建华，刘冬冬，徐宁，等.CLSI EP15-A3在临床生化精密度验证中的应用[J].临床检验杂志，2016，34（3）：215-218.[15]杨志钊，缪丽韶，杨山虹，等.利用CLSI EP15-A3指南验证精密度和准确性[J].国际检验医学杂志，2010，31（3）：231-232.[16]刘双，丛主林，王乐家斯，等.全自动血凝分析仪ACL TOP 700性能验证及评价[J].海南医学，2018，29（11）：1531-1533.[17]石文，戴永辉，邱峰，等.CLSI EP9-A3在血液分析仪比对中的应用[J].临床检验杂志，2016，34（1）：67-69.（收稿日期：2020-09-22）2.6　携带污染率检测结果显示PT/FIB、APTT/TT、FIB、TT/APTT、K1、K2的携带污染率CV值分别为-0.97%、0.50%、-0.52%、1.56%、2.56%、2.65%，均＜10%，符合要求，验证合格。3　讨论本研究在ISO15189体系下，参照CLSI颁布的EP系列文件，结合实际，对CS-2500全自动血凝分析仪进行了性能验证。精密度是用变异系数CV来衡量在规定的条件下对同一被测量品进行连续多次独立检验所得的测定结果之间的一致性。进行精密度验证是ISO15189体系中性能验证的关键一步[4]，也是进行其他项目性能验证的前提和基础[6]。准确性是衡量三次测量结果与靶值之间的一致程度的指标。线性范围是检测确定测定值与稀释倍数呈线性关系的范围。灵敏度是仪器测量最小被测量的能力，所测的最小量越小，该仪器的灵敏度越高。携带污染率是具体的量化携带污染，其值越小代表仪器检测过程样本相互影响越小。国内已有相应文献综述FIB项目比其他项目污染率高[5]。SysmexCS-2500全自动血凝分析仪检测项目的3Q性能验证结果均符合厂家标识要求，同时该血凝分析仪多数验证指标也能达到ISO15189的规定要求[6]。所以通过验证可以确定该血凝分析仪精密度良好、准确性可靠、线性相关性较好、灵敏度较高、携带污染率低并具有较好的自洁能力，可用于ISO15189认可的医学实验室凝血检测等工作，向临床提供准确真实可靠的检验数据。[参考文献][1]张彩宁.CA-510全自动血凝仪的临床应用[J].临床医药实践医，2011，20（2）：137-138.[2]初侨，席兴军，兰韬，等.谱类分析仪器性能确认用240CHINA MEDICINE AND PHARMACY Vol.11 No.5 March 2021