四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究

第４卷第４期２０２０年１２月现　代　牧　业ＭＯＤＥＲＮＡＮＩＭＡＬＨＵＳＢＡＮＤＲＹＶｏｌ．４　Ｎｏ．４Ｄｅｃ．２０２０四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究，２，２靳双星１，杨金佩１，王　强３，张桂枝１（１．河南牧业经济学院动物医药学院，河南郑州４５００４６；２．河南省家禽疾病防控工程技术研究中心，河南郑州４５００４６；３．广州智龙生物科技有限公司，广东广州５１００３２）摘要：本试验旨在研究有机酸盐防霉剂及其复配制剂对黄曲霉菌生长的抑制效果。试验选取双乙酸钠、丁酸钠、丙酸钙和山梨酸钾等四种有机酸盐，按一定浓度添加到黄曲霉菌生长的培养基中，采用二倍逐级稀释法测定四种有机酸盐对黄曲霉菌的最小抑菌浓度（Ｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ），采用涂布法和稀释平板计数法测定四种有机Ｍｉｎｉｍｕｍｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＢＣ）和杀菌率。按照不同比例进行有机酸盐的酸盐对黄曲霉菌的最小杀菌浓度（复配，测定不同复配混合液的联合抑菌指数即分级抑菌指数（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＦＩＣ）。双乙酸钠、丁酸ＩＣ分别为３２ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、６４ｍｇ／ｍＬ和６４ｍｇ／ｍＬ，对黄曲霉菌的ＭＢＣ分钠、丙酸钙和山梨酸钾对黄曲霉菌的Ｍ别为３２ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、６４ｍｇ／ｍＬ和１２８ｍｇ／ｍＬ。双乙酸钠对黄曲霉菌的杀菌效果最佳，质量浓度为１６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ和４ｍｇ／ｍＬ时的杀菌率分别为９８．６％、９５．０％和９２．１％。丁酸钠的杀菌效果次之，质量浓度为１６ｍｇ／ｍＬ、８ｇ／ｍＬ时的杀菌率分别为９１．２％、８４．４％和７２．０％。双乙酸钠与其他三种有机酸盐复配后均有协同作ｍｇ／ｍＬ和４ｍ用，以双乙酸钠与山梨酸钾按照２１复配效果最佳，混合有机酸盐的ＭＩＣ为１ｍｇ／ｍＬ。结果表明，四种有机酸盐中以双乙酸钠对黄曲霉菌的杀菌效果最强，双乙酸钠与山梨酸钾按照２１复配效果最佳。关键词：有机酸盐；黄曲霉菌；抑菌效果中图分类号：Ｓ８３１．７　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：２０９６－２９７５（２０２０）０４－０００１－０５ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｆｏｕｒｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｍｉｘｔｕｒｅｓｏｎＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ１，２１３１，２ＪＩＮＳＨｕａｎｇｘｉｎｇ，ＹＡＮＧＪｉｎｐｅｉ，ＷＡＮＧＱｉａｎｇ，ＺＨＡＮＧＧｕｉｚｈｉ（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＨｅｎａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙａｎｄＥｃｏｎｏｍｙ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＨｅｎａｎ４５００４６；２．ＨｅｎａｎＰｏｕｌｔｒｙＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＺｈｅｎｇｚｈｏｕＨｅｎａｎ４５００４６；３．ＧｕａｎｇｚｈｏｕＺｈｉｌｏｎｇＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．Ｌｔｄ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＧｕａｎｇｄｏｎｇ５１００３２）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓａｎｄｔｈｅｉｒｍｉｘｔｕｒｅｓｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｏｆＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ．Ｆｏｕｒｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓａｔａｃｅｒｔａｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｕｃｈａｓｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅ，ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅ，ｃａｌｃｉｕｍｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄａｎｄａｄｄｅｄｔｏｔｈｅｇｒｏｗｔｈｍｅｄｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ．ＴｈｅＭＩＣ）ａｇａｉｎｓｔＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｄｏｕｂｌｅｓｔｅｐｂｙｓｔｅｐｄｉｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄ，ｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ａｎｄｔｈｅｍｉｎｉｍｕｍｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＭＢＣ）ａｎｄｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｒａｔｅｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｃｏａｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄａｎｄｄｉｌｕｔｉｏｎｐｌａｔｅｃｏｕｎｔｉｎｇｍｅｔｈｏｄ．Ｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓｗｅｒｅｃｏｍｐｏｕｎｄａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｎｔｈｅｃｏｍｂｉｎｅｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉ．ｅ．ｔｈｅｆｒａｃｔｉｏｎａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ（ＦＩＣ）ｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．，ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅ，ｃａｌｃｉｕｍｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅｆｏｒＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓｗｅｒｅ３２ｍｇ／ＴｈｅＭＩＣｓｏｆｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｍＬ，３２ｍｇ／ｍＬ，６４ｍｇ／ｍＬａｎｄ６４ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅＭＢＣｆｏｒＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓｗｅｒｅ３２ｍｇ／ｍＬ，３２ｍｇ／ｍＬ，６４ｍｇ／ｍＬａｎｄ１２８ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＴｈｅＭＩＣｓｏｆｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅ，ｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅ，ｃａｌｃｉｕｍｐｒｏｐｉｏｎａｔｅａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅａｇａｉｎｓｔＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓｗｅｒｅ３２ｍｇ／ｍＬ，３２ｍｇ／ｍＬ，６４ｍｇ／ｍＬａｎｄ６４ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ａｎｄｔｈｅＭＢＣｗｅｒｅ３２　收稿日期：２０２０－１０－０６河南省重大科技专项计划项目（１６１１００５１０２００）；河南省重点研发与推广专项（１９２１０２１１０１８３）。　基金项目：　作者简介：靳双星（１９７０—），男，河南太康人，硕士，教授。　通讯作者：张桂枝（１９７０—），女，河南原阳人，硕士，副教授。

靳双星，等：四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究ｍｇ／ｍＬ，３２ｍｇ／ｍＬ，６４ｍｇ／ｍＬａｎｄ１２８ｍｇ／ｍＬ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＳｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｅｆｆｅｃｔｏｎＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ．Ｗｈｅｎｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｗａｓ１６ｍｇ／ｍＬ，８ｍｇ／ｍＬａｎｄ４ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｒａｔｅｗａｓ９８．６％，９５．０％ａｎｄ９２．１％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｅｆｆｅｃｔｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｗａｓｔｈｅｓｅｃｏｎｄ．Ｗｈｅｎｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｂｕｔｙｒａｔｅｗａｓ１６ｍｇ／ｍＬ，８ｍｇ／ｍＬａｎｄ４ｍｇ／ｍＬ，ｔｈｅｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｒａｔｅｗａｓ９１．２％，８４．４％ａｎｄ７２．０％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅａｎｄｏｔｈｅｒ３ｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｆｕｎｇｉｃｉｄｅｓｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｈａｄｓｙｎｅｒｇｉｓｔｉｃｅｆｆｅｃｔｗｉｔｈｏｔｈｅｒｔｈｒｅｅｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｓａｌｔｓ．Ｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｃｏｍ１，ａｎｄｔｈｅＭＩＣｏｆｍｉｘｅｄｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｗａｓ１ｍｇ／ｍＬ．Ｔｈｅｂｅｓｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｗａｓｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｐｏｕｎｄｅｆｆｅｃｔａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏ２ａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅｉｎｔｈｅｒａｔｉｏｏｆ２１，ａｎｄｔｈｅＭＩＣｏｆｔｈｅｍｉｘｔｕｒｅｗａｓ１ｍｇ／ｍＬ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅｈａｄｔｈｅｂｅｓｔｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｅｆｆｅｃｔｏｎＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ，ａｎｄｔｈｅｂｅｓｔｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｏｄｉｕｍｄｉａｃｅｔａｔｅａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｓｏｒｂａｔｅｗａｓ２１．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｏｒｇａｎｉｃａｃｉｄｓａｌｔ，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ，ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔ　　黄曲霉菌是一种常见腐生真菌，３０％～６０％的菌株能产生有致癌作用的黄曲霉毒素。近年来我国饲料和饲料原料中黄曲霉菌及其毒素的检出率较高，超标十分严重。郭志青［１］对山东省９个花生主产区的土壤、花生荚果及花生仁进行采样检测，不同产区土壤、花生荚果中黄曲霉菌的检出率为７％～１８％，花生籽仁中黄曲霉毒素的含量为５．０１～２６．８０μｇ／ｋｇ。陈丽媛［２］对２０１８年的玉米、小麦、麸皮等饲料原料样品进行检测，黄曲霉毒素Ｂ１的检出率为１００％，样本含量平均值为１０．０１μｇ／ｋｇ，最高值达７９．５５μｇ／ｋｇ，远远超过国家规定的限量标准。黄曲霉毒素主要攻击动物的肝脏，降低其免疫能力，使动物对病原微生物的易感性增加。饲料防霉剂是一类能降低饲料中霉菌数量、抑制霉菌毒素产生、防止饲料霉变的饲料添加剂［３］。目前常用的防霉剂主要分为有机酸防霉剂、有机酸盐防霉剂和复合防霉剂三类［４］。本试验研究双乙酸钠、丁酸钠、丙酸钙和山梨酸钾等四种有机酸盐防霉剂及其复配制剂对黄曲霉菌生长的抑制效果，旨在为有机酸盐防霉剂在饲料工业中的应用提供理论依据和技术参考。１　材料与方法１．１　试验材料１．１．１　菌种ＡＴＣＣ２８５３９型黄曲霉菌株购自上海北思生物公司。１．１．２　药品马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ）和ＲＰＭＩ１６４０培养基购自南京建成生物工程研究所。双乙酸钠（含量不低于９９％）、丙酸钙（含量不低于９８％）、丁酸钠（含量不低于９８％）和山梨酸钾（含量不低于９８％）均购自河南省万家标准物质研发中心有限公司。１．１．３　主要仪器ＦＡ２２０４Ｎ型分析天平、ＤＨ６０００ＩＩ型电热恒温培养箱、ＹＸＱ－ＬＳ－１００型高压灭菌锅、ＳＷ－ＣＪ－２ＦＤ型超净工作台、ＷＹＳ－０３Ｂ型双目生物显微镜等。１．２　方法１．２．１　菌种活化取黄曲霉菌标准菌株，加活化液体培养基５００μＬ，摇晃溶解后用接种环挑取菌液，划线接种于ＰＤＡ平皿上，２８℃培养３～４ｄ。用接种环挑取单个菌落，在平板上划线培养，２～３ｄ以后在培养基中加入适量ＲＰＭＩ１６４０培养液进行冲洗，用移液吹打使黄曲霉菌的孢子悬浮于培养液中。１．２．２　孢子计数和试验菌液的配制收集黄曲霉菌孢子溶液，８０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，用无菌纱布过滤３次除去菌丝，备用。吸取黄曲霉菌孢子菌液滴于血细胞计数板中，在光学显微镜下计数，然后加入适量ＲＰＭＩ１６４０培养液，调整菌液浓度为１×１０３～５×１０３ｃｆｕ／ｍＬ，置４℃冰箱保存备用。１．２．３　有机酸盐防霉剂的配制用电子天平称取适量的双乙酸钠、丙酸钙、山梨酸钾和丁酸钠，用灭菌的蒸馏水配制成质量浓度均为１２８ｍｇ／ｍＬ的溶液，经０．２２μｍ滤膜过滤后分装于灭菌小瓶中，置４℃冰箱保存备用。１．２．４　最小抑菌浓度（Ｍｉｎｉｍｕｍｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＩＣ）的测定参照美国临床标准化委员会（ＣＬＳＩ）提出的丝状真菌药物敏感试验方案［５］，采用二倍逐级稀释法测定４种有机酸盐防霉剂对黄曲霉菌的ＭＩＣ，以无

靳双星，等：四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究培养物生长的最低药物质量浓度为ＭＩＣ，每种防霉取平均数。剂试验重复３次，１．２．５　最小杀菌浓度（Ｍｉｎｉｍｕｍｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＭＢＣ）和杀菌率测定从每个试验孔中取出培养液１００μＬ，加入ＰＤＡ培养基中，采用灭菌的涂布棒涂布均匀。将平板倒置于恒温培养箱内，２８℃培养３ｄ，观察并记录数据。以平板上没有菌落生长的最小药物质量浓度为ＭＢＣ，有菌落生长的平板进行菌落计数，计算杀菌率。杀菌率＝（阳性对照组菌落数－试验组菌落数）／阳性对照组菌落数×１００％。１．２．６　联合抑菌试验选取抑菌效果最好的一种防霉剂（双乙酸钠），与其他３种防霉剂按照４１、３１、２１、３２、１１、２３、１２、１３和１４的比例复配，测定每种复配制剂的ＭＩＣ，操作方法同１．２．４，每组试验重复３次，取平均数。计算联合抑菌指数即分级抑菌指数（Ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ＦＩＣ）。ＦＩＣ＝Ａ药联合时ＭＩＣ／Ａ药单独用药ＭＩＣ＋Ｂ药联合时ＭＩＣ／Ｂ药单独用药ＭＩＣ。ＦＩＣ．５为协同作用，０．５＜≤０ＦＩＣ１＜ＦＩＣＦＩＣ＞２≤１为相加作用，≤２为无关作用，为拮抗作用。４种有机酸盐防霉剂对黄曲霉菌的体外生长均ＩＣ均为３２．００有抑制作用，双乙酸钠和丁酸钠的Ｍｍｇ／ｍＬ，丙酸钙和山梨酸钾的ＭＩＣ均为６４．００ｍｇ／ｍＬ。２．２　ＭＢＣ和杀菌率四种有机酸盐防霉剂对黄曲霉菌的杀菌率见表１。由表１可知，有机酸盐防霉剂对黄曲霉菌的杀菌效果随质量浓度的增加而增强。四种有机酸盐中以双乙酸钠对黄曲霉菌的杀菌效果最佳，其ＭＢＣ为３２ｍｇ／ｍＬ，当双乙酸钠的质量浓度为１６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ和２ｍｇ／ｍＬ时，其对黄曲霉菌的杀菌率分别为９８６％、９５．０％、９２．１％和８０％。丁酸钠对黄曲霉菌的杀菌效果次之，其ＭＢＣ为３２ｍｇ／ｍＬ，当丁酸钠的质量浓度为１６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ、４ｍｇ／ｍＬ和２ｍｇ／ｍＬ时，其对黄曲霉菌的杀菌率分别为９１．２％、８４．４％、７２０％和５４．１％。丙酸钙的ＭＢＣ为６４ｍｇ／ｍＬ，当丙酸钙的质量浓度为３２ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ、８ｍｇ／ｍＬ和４ｍｇ／ｍＬ时，对黄曲霉菌的杀菌率分别为９３．０％、９００％、６６．７％和４２．６％。山梨酸钾对黄曲霉菌的杀菌效果最差，其ＭＢＣ为１２８ｍｇ／ｍＬ，当山利酸钾的质量浓度为６４ｍｇ／ｍＬ、３２ｍｇ／ｍＬ、１６ｍｇ／ｍＬ和８ｍｇ／ｍＬ时，对黄曲霉菌的杀菌率分别为９９．９％、９０．０％、６６．７％和４２．０％。２　结果２．１　ＭＩＣ测定结果表１　４种防霉剂对黄曲霉菌的杀菌率防霉剂浓度／（ｍｇ／ｍＬ）双乙酸钠的杀菌率／％丁酸钠的杀菌率／％丙酸钙的杀菌率／％山梨酸钾的杀菌率／％　　注：“－”表示未统计１２８１００１００１００１００６４１００１００１００９９．９３２１００１００９３．０９０．０１６９８．６９１．２９０．０６６．７８９５．０８４．４６６．７４２．０４９２．１７２．０４２．６－２８０．０５４．１－－１４８．２－－－２．３　双乙酸钠与丁酸钠复配联合抑菌效果双乙酸钠与丁酸钠按照４１、３１、２１、３２、１１、２３、１２、１３和１４的比例复配，混合液的ＭＩＣ和ＦＩＣ见表２。由表２可知，在双乙酸钠与丁酸钠的９种配比混合液中，除１４配比混合液的ＭＩＣ为１６ｍｇ／ｍＬ外，其余８种配比混合液双乙酸钠丁酸钠复配液中双乙酸钠的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中丁酸钠的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中双乙酸钠和丁酸钠总的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）ＦＩＣ４１３．２０．８４０．１２５３１３１４０．１２５的ＭＩＣｇ／ｍＬ，显著低于双乙酸钠单用（３２ｍｇ／≤８ｍｍＬ）和丁酸钠单用（３２ｍｇ／ｍＬ）的ＭＩＣ。ＦＩＣ值均小于或等于０．５，说明两种有机酸盐复配对黄曲霉菌的抑制有协同作用。双乙酸钠与丁酸钠配比为３１和４１时混合液的ＭＩＣ均为４ｍｇ／ｍＬ，ＦＩＣ值为０１２５，配比较佳。２１５．３４２．６６８０．２５３２４．８３．２８０．２５１１４４８０．２５２３３．２４．８８０．２５１２２．６６５．３４８０．２５１３２．０６．０８０．２５１４３．２１２．８１６０．５０表２　双乙酸钠与丁酸钠联合对黄曲霉菌的抑制效果

靳双星，等：四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究２．４　双乙酸钠与丙酸钙复配联合抑菌效果双乙酸钠与丙酸钙按照４１、３１、２１、３２、１１、２３、１２、１３和１４的比例复配，混合液ＭＩＣ和ＦＩＣ见表３。由表３可知，双乙酸钠与丙酸钙的９种配比混合液的ＭＩＣ２ｍｇ／ｍＬ，其≤３１和４１时，混合中双乙酸钠与丙酸钙配比为３液的ＭＩＣ为８ｍｇ／ｍＬ，显著低于双乙酸钠单用（３２）和丙酸钙单用（６４ｍｇ／ｍＬ）的ＭＩＣ。双乙酸ｍｇ／ｍＬ钠与丙酸钙配比为３１和４１时，ＦＩＣ值分别为０．２１９和０２２５，均小于０５，说明双乙酸钠与丙酸钙复配对黄曲霉菌的抑制有协同作用，配比较佳。表３　双乙酸钠与丙酸钙联合对黄曲霉菌的抑制效果双乙酸钠丙酸钙复配液中双乙酸钠的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中丙酸钙的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中双乙酸钠和丙酸钙总的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）ＦＩＣ４１６．４１．６８０．２２５３１６．０２．０８０．２１９２１１０．６６５．３３１６０．４１６３２１９．２１２．８３２０．８０１１１６１６３２０．７５２３１２．８１９．２３２０．７０１２１０．６６２１．３３３２０．６７１３８．０２４．０３２０．６２５１４６．４２５．６３２０．６０２．５　双乙酸钠与山梨酸钾复配联合抑菌效果双乙酸钠与山梨酸钾按照４１、３１、２１、３２、１１、２３、１２、１３和１４的比例复配，ＩＣ和ＦＩＣ见表４。由表４可知，双乙酸钠混合液Ｍ与山梨酸钾的９种配比混合液的ＭＩＣ均远小于双双乙酸钠山梨酸钾复配液中双乙酸钠的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中山梨酸钾的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）复配液中双乙酸钠和山梨酸钾总的ＭＩＣ／（ｍｇ／ｍＬ）ＦＩＣ４１１．６０．４２０．０５６３１１．５０．５２０．０５５乙酸钠单用（３２ｍｇ／ｍＬ）和山梨酸钾单用（６４ｍｇ／）的ＭＩＣ。ＦＩＣ值均小于０．５，说明双乙酸钠与山ｍＬ梨酸钾复配对黄曲霉菌的抑制有协同作用。双乙酸１时，ＦＩＣ值只有０．０２６，混钠与山梨酸钾配比为２合液ＭＩＣ为１ｍｇ／ｍＬ，配比最佳。２１０．６７０．３３１０．０２６３２１．２０．８２０．０５１１４．０４．０８．００．１９２３０．８１．２２０．０４４１２０．６７１．３３２０．０４７１３０．５１．５２０．０３９１４０．４１．６２０．０３８表５　双乙酸钠与山梨酸钾联合对黄曲霉菌的抑制效果３　讨论本试验结果表明，双乙酸钠、丁酸钠、丙酸钙和山梨酸钾等四种有机酸防霉剂对黄曲霉菌的生长均有抑制作用，抑菌效果随着防霉剂质量浓度的增加而增强，达到一定的质量浓度后有完全的杀菌作用，其中以双乙酸钠的抑制效果最佳，其次是丁酸钠。６］报道双乙酸钠对黑曲霉、黑根霉、杨晓丽等［安全、高效的防霉添加剂。双乙酸钠作为饲料添加剂，除具有抑菌、防霉作用外，还有提高饲料的蛋白质利用率、改善饲料报酬和促生长等功效。在家禽饲粮中添加双乙酸钠能提高雏鸡的存活率和蛋鸡的１０］。在肉鸭饲粮中添加双乙酸钠能促进肉产蛋率［１１］鸭生长，提高饲料转化率和经济效益［。在断奶仔猪饲粮中添加双乙酸钠能促进肠道健康，提高养分１２］消化率、日增重和胴体瘦肉率［。黄曲霉和黄青霉的抑制效果优于山梨酸钾，双乙酸钠对黑根霉的防霉效果比对黄青霉和黄曲霉的防霉７］效果好。葛明兰等［报道双乙酸钠和苯甲酸均对丁酸钠的抑制效果仅次于双乙酸钠。王曼曼１３］报道丁酸钠不是通过改变菌体ｐＨ值来抑制等［细菌增长，而是通过自身的溶解发挥抑菌作用。丁酸钠作为饲料添加剂，除具有抑菌、防霉作用外，还具有维持肠道平衡、改善小肠形态、促进小肠吸收、增强机体免疫力等功能。丁酸钠作为短链脂肪酸可以为肠道提供部分能量，当畜禽因应激发生肠道损伤时，丁酸钠有助于恢复肠道的健康。在日粮中添加一定量的丁酸钠可以增加肠道内免疫细胞数量，１４］从而增强肠道免疫反应［。黄曲霉菌有抑制作用，双乙酸钠的抑菌效果优于苯８］甲酸。张铮等［比较了丙酸钙、柠檬酸、双乙酸钠和山梨酸钾对非密封状态下乳酸菌发酵饲料的防霉效果，发现双乙酸钠和丙酸钙的抑菌效果优于山梨酸钾和柠檬酸，２％丙酸钙和０．３％双乙酸钠的防霉９］报道日粮中添加双乙酸钠效果较佳。王子苑等［能改善发酵全混合日粮的品质，抑制霉菌的繁殖，减少干物质的损失。上述研究证实，双乙酸钠是一种双乙酸钠与其他３种防霉剂按照不同比例复

靳双星，等：四种防霉剂及其复配对黄曲霉菌抑制效果的研究配，以双乙酸钠与山梨酸钾复配效果最佳。双乙酸１时，混合液的ＭＩＣ为１钠与山梨酸钾配比为２ｍｇ／ｍＬ，ＦＩＣ值为０．０２６；双乙酸钠与丁酸钠配比为３１和４１时，混合液的ＭＩＣ均为４ｍｇ／ｍＬ，ＦＩＣ值为０．１２５；双乙酸钠与丙酸钙配比为３１和４１时，混合液的ＭＩＣ均为８ｍｇ／ｍＬ，ＦＩＣ值为０．２１９和０．２２５。上述试验结果表明，双乙酸钠与其他三种防霉剂复配对黄曲霉菌的抑制作用显著增强。徐铠煜等［１５］今日养猪业，２０１９（０５）：１００－１０１．［４］王雪洋，韩淑敏，李金库，等．防霉剂在饲料中的应用［Ｊ］．畜牧与饲料科学，２０１９，４０（０３）：５０－５２．［５］连凯霞，蒋国政，李继昌．复合酸化剂对饲料的防霉及酸化作用［Ｊ］．中国饲料，２０１３（１３）：８－１０．［６］杨晓丽，韩克勤．双乙酸钠对霉菌抑制作用的研究［Ｊ］．天津师范大学学报，２００３，２３（０２）：２６－２８．［７］葛明兰，沈齐英，明俊．双乙酸钠的合成及对霉菌的抑制Ｊ］．广西科学，２００３，１０（０２）：１０４－１０６．作用［［８］张铮，陆扬，石青松，等．不同防霉剂对发酵饲料的防霉采用抑菌圈法研究了复配型防霉剂对十种粮食霉菌的抑制效果，发现双乙酸钠与山梨酸钾的复配效果明显优于双乙酸纳与丙酸钙的复配效果，相比于双乙酸钠、山梨酸钾和丙酸钙单独使用，双乙酸钠与山梨酸钾复配也有明显的增效作用，这与本试验的结果一致。４　结论双乙酸钠、丁酸钠、丙酸钙和山梨酸钾等四种防霉剂对黄曲霉菌的体外生长均有一定的抑制作用，以双乙酸钠对黄曲霉菌的抑菌效果最强，防霉剂对黄曲霉菌的抑制效果随着质量浓度的升高而增强。双乙酸钠与其他三种药物复配后对黄曲霉菌的抑制均有显著的协同作用，以双乙酸钠与山梨酸钾按照２１比例复配效果最佳。参考文献：［１］郭志青，吴菊香，张霞，等．山东省花生产区土壤和荚果中黄曲霉菌及其毒素污染状况调查［Ｊ］．中国油料作物学报，２０１９，４１（０５）：７６５－７２２．［２］陈丽媛．２０１８年１～６月饲料及原料霉菌毒素饲料报告［Ｊ］．国外畜牧学（猪与禽），２０１８，３８（０８）：７０－７２．［３］王丽娜，周盛昌．防霉剂和脱霉剂在饲料中的应用［Ｊ］．效果比较［Ｊ］．畜牧与兽医，２０１９，５１（０３）：２９－３３．［９］王子苑，舒健虹，陈光吉，王小利，李世歌．添加双乙酸钠对发酵全混合日粮发酵品质和霉菌毒素含量的影响［Ｊ／ＯＬ］．动物营养学报：１－９［２０２０－１１－０４］．ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／１１．５４６１．Ｓ．２０２００８１０．１２１２．０１２．ｈｔｍｌ．［１０］陈文宁，王餠．浅谈双乙酸钠在动物生产中的应用［Ｊ］．江西饲料，２０１８（０１）：１０－１２．［１１］赵明德，赵智华，刘安芳．肉鸭日粮中添加双乙酸钠的效果研究［Ｊ］．黑龙江畜牧兽医，２００５（０９）：５７－５８．［１２］王国良，孙永贵，黄大鹏，等．双乙酸钠对育肥猪生长性能及肌肉品质的影响［Ｊ］．黑龙江八一农垦大学学报，２００８，２０（０１）：５９－６２．［１３］王曼曼，陈宝江，梁陈冲，等．丁酸钠作用机理及其在畜牧生产中应用研究进展［Ｊ］．当代畜禽养殖业，２０１１（０７）：３０－３２．［１４］左丽君，姜宁，张爱忠．丁酸钠对畜禽机体营养及免疫调控作用的研究进展［Ｊ］．中国畜牧杂志，２０１９，５５（０４）：２５－２８．［１５］徐铠煜，伍松陵，宋慧．复配型防霉剂对十种粮食霉菌抑制效果评价［Ｊ］．中国粮油学报，２０１０，２３（０３）：９８－１００．（责任编辑：刘永祥）